O Conclave de 1565-1566 foi o primeiro em várias décadas que não foi sujeito a uma pressão significativa dos monarcas seculares. Os cardeais franceses, com exceção de um, não vieram a Roma, pois uma guerra religiosa travada neste país significava que o tribunal de Paris não teria nem o tempo nem a habilidade de influenciar a eleição do Papa. Os governantes que mantinham alguma influência no colégio dos cardeais, o grão-duque da Toscana, Cosme I de Médici e o rei Felipe II de Espanha. O primeiro tinha como favorito o cardeal Ricci, enquanto o rei de Espanha, desta vez se absteve de interferir na escolha papal. Disse apenas que deveria ser escolhido um homem digno do cargo. O que apenas vincula as instruções dos Cardeais para a sua candidatura era a de excluir o cardeal d'Este e os cardeais franceses.
Nesta situação, apenas o partido mais forte, mas não forte o suficiente para avançar com a sua vontade por si só foi o partido dos cardeais criados pelo Papa Pio IV, centrada em torno de seus sobrinhos Carlos Borromeu e Mark Sittich von Hohenems. Além disso, um grupo de cardeais foi aliado com o duque da Toscana (entre eles seu filho, Ferdinando de' Medici, Niccolini, Sforza) e o grupo dos criados por Paulo IV, liderados pelo camerlengo Vitelli, com seus apoiadores também envolvidos na sua própria eleição, com as campanhas dos cardeais Alessandro Farnese e Ippolito d'Este.
Cinquenta e dois cardeais entraram no conclave, em 20 de dezembro[2]. Pela primeira vez em muito tempo, havia setenta cardeais formando o Colégio Cardinalício. Tal fato só se repetiria no Conclave de 1669-1670 e depois, no Conclave de 1963[2]. Com a morte de um cardeal durante o conclave, além da saída de mais dois durante a votação, ao final, quarenta e nove cardeais elegeram o novo Papa, o cardeal Antonio Michele Ghislieri, que tomaria o nome de Papa Pio V.
